产品货号：
GS5306
中文名称：
T7 RNA聚合酶
英文名称：
T7 RNA Polymerase
产品规格：
5kU|25kU
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
基本信息：
来源：大肠杆菌
酶活性：≥50U/μL
最适反应温度：37℃
产品应用：
酶活定义：
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
注意事项：
使用方法：
相关搜索：T7 RNA聚合酶，T7 RNA Polymerase
本制品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体T7 RNA聚合酶，以含有T7启动子序列(5'-TAATACGACTCACTATAG-3')的双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5'突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板，因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。
基本信息：
来源：大肠杆菌
酶活性：≥50U/μL
最适反应温度：37℃
产品应用：
- 合成单链RNA，包括mRNA、siRNA、gRNA等各类RNA的前体。
- 合成标记或未标记的高特异性RNA探针。
- 利用帽子类似物合成加帽的mRNA。
酶活定义：
在37℃、pH8.0的条件下，1h内使1nmol的[3H] GMP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。
产品组成：
| 组分 | 5kU | 25kU |
| T7 RNA聚合酶 | 100μL | 500μL |
| 10×转录缓冲液 | 400μL | 2mL |
保存：-20℃，有效期1年。
注意事项：
- 建议模板DNA最后加入反应体系。由于10×转录缓冲液中含有亚精胺，亚精胺浓度过高会引起DNA沉淀。
- 模板DNA的纯度对体外转录反应至关重要。质粒DNA提取过程中引入的RNase A残留会显著影响转录RNA的质量，建议使用OD260/280为1.8～2.0的高纯度RNase-free质粒。
- 模板DNA可通过线性化环状质粒或PCR获得。模板DNA上游需含有T7启动子序列，下游为平末端或编码链5'末端突出。
- 反应体系中添加无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。
使用方法：
- 在冰盒上建立以下反应体系：
成分 用量 终浓度 10×转录缓冲液 2μL 1× T7 RNA聚合酶 1μL 2.5U/μL NTP(各100mM) 0.4μL 各2mM 模板DNA 0.1～1μg 5～50ng/μL RNase抑制剂(40U/μL) 0.5～1μL 1～2U/μL RNase-free ddH2O 至20μL - - 用移液器轻轻混匀各组分，并短暂离心收集，37℃孵育3h。可根据产物片段大小适当的调整反应时间，如合成小于0.3kb的RNA，可将反应延长至4h或更长时间，16h过夜反应不会影响产物的质量。
- 待反应完成后，在反应体系中加入2μL的RNase-free DNase I，37℃孵育20min，消化转录的DNA模板，然后加入2μL的0.5M EDTA，65℃孵育10min终止消化反应。(可选)。
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